qPCR DNA의 양을 측정하는 데 사용되는 정교한 기술입니다. PCR을 사용하여 샘플에서 . qPCR 정량적 중합효소 연쇄 반응이라는 용어를 나타냅니다. . 고급 절차이지만 분석할 수 있습니다. qPCR 엑셀의 데이터. 이 기사에서는 2 qPCR 분석 방법 엑셀의 데이터. 그것들이 궁금하시다면 연습 워크북을 다운로드하고 팔로우하세요.
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qPCR 분석이란 무엇입니까?
qPCR 또는 정량적 중합효소 연쇄 반응 DNA의 양을 측정하는 데 사용되는 정교한 기술입니다. PCR(중합효소 연쇄 반응)을 사용하여 샘플에서 . qPCR 데이터를 분석하는 방법에는 두 가지가 있습니다.
이중 델타 CT 방식
2001년 리박 및 슈미트겐 이 분석 절차를 이중 델타 Ct라고 합니다. 방법. Paffl의 특정 사례입니다. 방법. 이 방법에 따르면 2 실험 데이터의 평균 세트(Gene Tested Experimental 및 하우스키핑 유전자 실험 ) 및 대조군 데이터(Gene Tested Control 및 가사 유전자 제어 ). 이 값을 사용하여 ∆CTE 값을 얻습니다. 및 ∆CTC , 각각.
∆CTE 값 Gene Tested Experimental(TE)의 공제 값을 나타냅니다. 및 Housekeeping Gene Experimental(HE) . ∆CTE의 일반적인 표현 입니다:
마찬가지로 ∆CTC 값은 Housekeeping Gene Control(HC)의 공제 값을 나타냅니다. 유전자 시험 대조군(TC) . 이 용어의 수학적 표현은 다음과 같습니다.
그 후 ∆∆Ct의 값을 추정해야 합니다. . ∆∆Ct의 값을 결정하는 공식 입니다:
마지막으로 유전자 발현 비율을 평가합니다. . 이 방법에 따르면 Primer Efficiency 실험 및 대조군 유전자 모두에 대해 100% . 따라서 유전자 발현 비율의 표현은 입니다:
파플 방식
파플 방법은 qPCR의 일반적인 방법입니다. 분석. 이 방법은 이중 델타 CT와 유사합니다. 방법. 그러나 기본 효율 이 방법의 값은 100%가 아닙니다. . 아무 숫자나 될 수 있습니다. 일반적으로 이 값은 90% 사이로 유지됩니다. 110%까지 가정 유지 유전자(HKG) 모두에 대해 및 관심 유전자(GOI) . 2001년 마이클 파플 Nucleic Acids Research에서 이 분석 공식을 제공했습니다. 저널.
이 접근 방식에서는 두 세트의 데이터를 입력해야 합니다. 이 데이터를 사용하여 평균값을 계산합니다. 그런 다음 대조군 샘플의 평균을 추정합니다. 이것으로부터 ∆Ct의 값을 결정할 것입니다. . ∆Ct 의 표현 입니다:
또한, 유전자 발현 비율을 분석하는 수학 공식 입니다:
Excel에서 qPCR 데이터를 분석하는 2가지 쉬운 방법
이번 대회에서는 qPCR 3에 대한 데이터 또는 5 데이터 샘플. 먼저 이중 델타 CT에 대한 분석을 수행합니다. 방법을 설명한 다음 Pfaffl 방법을 시연하겠습니다. .
1. Double Delta Ct 방법을 통한 qPCR 데이터 분석
qPCR 분석용 이중 델타 CT를 통한 데이터 방법에서 5의 데이터세트를 고려합니다. DNA 샘플. 이 방법에서는 PCR Primer Efficiencies의 값을 고려해야 합니다. 실험 유전자와 대조군 유전자 모두 100%입니다. . 우리는 이것이 Pfaffl 방식의 특정한 경우라고 주장할 수도 있습니다. 단계는 다음과 같이 분석됩니다.
📌 단계:
- 우선 모든 유전자 값을 그림과 같이 정확하게 입력합니다. Gene Tested Experimental(TE)의 모든 실험값을 입력해야 합니다. 및 Housekeeping Gene Experimental(HE) 열 B 및 C 마찬가지로 Gene Tested Control(TC)의 모든 대조군 값을 입력합니다. 및 하우스키핑 유전자 제어(HC) 열 D 및 E 각각.
- 이제 F5 셀에서 , ∆CTE 값 계산 , 다음 공식을 적으세요.
=B6-C6
- Enter 키를 누릅니다. .
- 마찬가지로 ∆CTC의 값을 추정하려면 , G5 셀에 다음 수식을 작성하십시오. .
=D6-E6
- 다시 Enter 키를 누릅니다. .
- 그런 다음 H5 셀을 선택합니다. ∆∆Ct 값을 얻기 위해 다음 공식을 작성하십시오. .
=F6-G6
- Enter 키를 누릅니다. .
- 마지막으로, 유전자 발현 비율의 값을 계산하기 위해 또는 2^(−∆∆Ct) , I5 셀에 다음 수식을 작성하십시오. .
=2^(-H6)
- Enter 키를 누릅니다. 마지막으로.
- 그런 다음 F6:I6 셀의 범위를 선택합니다. .
- 더블 클릭 채우기 핸들에서 수식을 10 행까지 복사하는 아이콘 .
- 유전자 발현 비율의 값을 얻을 수 있습니다. 모든 샘플에 대해.
따라서 우리의 방법이 완벽하게 작동했으며 qPCR Excel의 데이터입니다.
🔍 결과 해석
유전자 발현 비율의 값 0.6507 중 셀 I5 테스트된 조건의 유전자 샘플을 의미합니다. 통제 조건과 관련하여 모두 하우스키핑 유전자에 대해 정규화되었습니다. 또한 백분율 용어로 고려할 수 있습니다. 0.6507 65.07%를 의미합니다. 테스트된 조건에서의 유전자 발현 통제 조건으로 .
자세히 알아보기:Excel에서 대용량 데이터 세트를 분석하는 방법(6가지 효과적인 방법)
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2. Pfaffl 방법을 사용하여 qPCR 분석
이 접근 방식에서는 Pfaffl 방법을 사용합니다. . 이 방법과 이중 델타 CT의 주요 차이점 방법은 PCR Primer Efficiencies 값에 있습니다. 100%가 아닌 실험 유전자와 대조군 유전자 모두에 대해 . 이 예에서는 프라이머 효율성을 가정합니다. 두 경우 모두에 대한 값입니다. 가정 유지 유전자의 경우 샘플에서 Primer Efficiency의 가치를 가정합니다. 93%입니다. , 반면 관심 유전자 의 경우 이 값은 101%입니다. 이 방법의 단계는 다음과 같습니다.
📌 단계:
- 처음에는 이미지와 같이 모든 유전자 값을 정확하게 입력합니다. treated의 두 세트를 모두 입력해야 합니다. 및 제어 가정 유지 유전자(HKG) 의 유전자 값 및 관심 유전자(GOI) . 두 유전자 세트 모두 Ct-1으로 표시됩니다. 및 Ct-2 각각.
- 먼저 가정 유지 유전자(HKG) 에 대한 모든 계산을 완료합니다. 섹션.
- 이제 두 세트의 평균값을 취하겠습니다. 이를 위해 AVERAGE 함수를 사용할 것입니다. .
- E6 셀에 다음 수식을 작성합니다. .
=AVERAGE(C6:D6)
- Enter 키를 누릅니다. .
- 그런 다음 더블 클릭 채우기 핸들에서 수식을 E11 셀까지 복사하는 아이콘 .
- 그 후에 3의 평균을 추정해야 합니다. 값을 제어합니다.
- 이를 위해 병합된 F6
=AVERAGE(E9:E11)
- Enter 키를 누릅니다. .
- 이제 G6 셀을 선택합니다. 다음 공식을 작성하여 ∆Ct 값을 구하세요. . 절대 셀 참조를 입력했는지 확인합니다. F6 셀의 경우 .
=E6-$F$6
- 다시 Enter 키를 누릅니다. .
- 그런 다음 더블 클릭 채우기 핸들에서 G11 셀까지 수식을 복사하는 아이콘 .
- 가정 유지 유전자(HKG)에 대한 모든 계산 완료되었습니다.
- 마찬가지로, 동일한 프로세스에 따라 관심 유전자(GOI)에 대한 모든 계산을 완료합니다. 섹션.
- 마지막으로 O6 셀에서 , 다음 공식을 작성하여 표현 비율의 값을 구하십시오. 절대 셀 참조 확인 N6 셀의 경우 및 H6 .
=($N$6^M6)/($H$6^G6)
- Enter 키를 누릅니다. 마지막으로.
- 이제 더블 클릭 채우기 핸들에서 O11 셀까지 수식을 복사하는 아이콘 .
- 모든 샘플에 대한 표현 비율 값을 얻을 수 있습니다.
따라서 우리의 방법이 성공적으로 작동했으며 qPCR을 분석할 수 있다고 말할 수 있습니다. Excel의 데이터입니다.
결론
이것이 이 기사의 끝입니다. 이 기사가 귀하에게 도움이 되고 qPCR을 분석할 수 있기를 바랍니다. 엑셀의 데이터. 추가 질문이나 권장 사항이 있는 경우 아래 의견 섹션에서 추가 쿼리 또는 권장 사항을 공유하십시오.
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